长链非编码RNA-核富集转录本1对创伤性脑损伤小鼠的神经保护作用及其可能机制
吴依凡1 柴伟娜1 蒋理1 吴越1 李运洁2 孙晓川1
1 重庆医科大学附属第一医院神经外科 400016； 2 重庆医科大学附属第一医院核医学科 400016
Neuroprotective effect of long noncoding RNA-nuclear-enriched abundant transcript 1 on traumatic brain injury in mice and its possible mechanism
Wu Yifan, Chai Weina, Jiang Li, Wu Yue, Li Yunjie, Sun Xiaochuan.
摘要 目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA） 核富集转录本1（NEAT1）的表达对创伤性脑损伤（TBI）后神经功能和神经元凋亡的影响及其可能机制。 方法 将90只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、空白对照组、空载病毒1组和2组及NEAT1上调组和NEAT1下调组，每组15只。构建小鼠控制性皮层撞击（CCI）模型模拟TBI状态，并通过侧脑室内注射腺病毒载体对NEAT1水平进行干预。采用神经功能缺失评分（NSS）及Morris水迷宫试验评估空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组小鼠伤后1周内及14~21d时神经功能变化。Western blot检测空白对照组小鼠皮层含死亡结构域的p53诱导蛋白1（Pidd 1）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）-2、caspase-9和caspase-3在伤后6 h、1,3,7 d的表达。TUNEL法检测空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组伤后第3天小鼠神经元凋亡情况及免疫荧光半定量分析Pidd1的表达及定位。Western blot检测假手术组、空白对照组、空载病毒组、NEAT1上调组及NEAT1下调组小鼠伤后第3天Pidd1、caspase-2、细胞色素c（Cyt c）和caspase-3蛋白表达量。 结果 与空白对照组［(4.9±1.0)分］比较，NEAT1上调组伤后第1天NSS［(3.5±0.7)分］显著降低（P＜0.01），NEAT1下调组［(5.0±1.5)分］显著升高（P＜0.01）。Morris水迷宫试验显示，与空白对照组［（20.1±5.6）s］比较，伤后第19天NEAT1上调组寻找平台时间［(10.9±2.8)s］缩短（P＜0.05），NEAT1下调组寻找平台时间［(30.7±6.2)s］延长（P＜0.01）。Western blot提示，空白对照组Pidd1、caspase-2、caspase-9和caspase-3在伤后第3天表达明显升高（P＜0.01）。通过TUNEL得到伤后第3天NEAT1上调组神经元凋亡率［(18.0±2.7)%］明显下降，而NEAT1下调组 ［(63.0±8.6)%］明显升高（P＜0.01）。伤后第3天免疫荧光提示，与空白对照组比较，NEAT1上调组神经元胞质中Pidd1蛋白表达［(22.7±2.2)%］减少（P＜0.01），而NEAT1下调组［（72.7±7.0）%］显著增加（P＜0.01）。伤后第3天Western blot显示，与空白对照组比较， NEAT1上调组Pidd1(0.5±0.0)、capsase-2(0.3±0.0)、Cyt c(0.5±0.0)及caspase-3(0.4±0.0)的表达明显减少（P＜0.01）；而NEAT1下调组结果则完全相反。 结论 TBI后NEAT1通过调控 Pidd1-caspase-2-Cyt c，减少caspase-3活化，抑制神经元凋亡，这可能是TBI后NEAT1保护神经功能的机制之一。
关键词 ：
脑损伤 ,
细胞凋亡 ,
长链非编码RNA-核富集转录本1
Key words ：
Brain injuries
Apoptosis
Long noncoding RNA-nuclear-enriched abundant transcript 1
基金资助: 国家自然科学基金(81701226)
通讯作者:
孙晓川， Email：sunxiaochuan@cqmu.edu.cn， 电话：13883022455
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