目的
探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)对后纵韧带骨化(OPLL)成骨作用的影响及其与转化生长因子－β(TGF－β)/Smad信号通路的关系。

方法
分别构建野生型pcDNA3.1－BMP2(WT)、突变型pcDNA3.1－BMP2(37G)、突变型pcDNA3.1－BMP2(190T)和突变型pcDNA3.1－BMP2(37G/190T)表达载体并琼脂糖凝胶电泳鉴定。在脂质体介导下，将构建载体导入小鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2，检测细胞内BMP2的表达情况。采用脂质体介导的真核细胞表达载体pcDNA3.1－BMP2转染小鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2。根据转染情况共分为6组：未转染组、空载体pcDNA3.1转染组、pcDNA3.1－BMP2(WT)转染组、pcDNA3.1－BMP2(37G)转染组、pcDNA3.1－BMP2(190T)转染组和pcDNA3.1－BMP2(37G/190T)转染组。根据是否包含BMP2多态性定义实验组与对照组，其中未转染组和空载体pcDNA3.1转染组为对照组，余为实验组。利用蛋白免疫印迹方法检测信号传导通路中磷酸化Smad1/5/8和Smad4蛋白表达水平；利用定量检测试剂盒检测细胞内成骨特异性蛋白碱性磷酸酶(ALP)，比较实验组中蛋白表达差异。

结果
琼脂糖凝胶电泳显示双酶切后可形成相对分子质量分别为1.2 kb和5.4 kb条带，测序验证与目标序列完全相符，表明载体构建成功。BMP2基因在C3H10T1/2细胞内可以成功转染并且稳定表达。蛋白免疫印迹检测表明，实验组转染后磷酸化Smad1/5/8蛋白表达水平明显增加，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。实验组转染后Smad4蛋白表达水平明显增加，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，其中pcDNA3.1－BMP2(37G)转染组和pcDNA3.1－BMP2(37G/190T)转染组Smad4蛋白表达水平增加明显，与其他实验组比较差异有统计学意义(P<0.05)，两组间差异无统计学意义(P>0.05)。稳定转染4周时细胞ALP活性测定结果显示，实验组转染后ALP活性明显增高，与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。其中pcDNA3.1－BMP2(37G)转染组和pcDNA3.1－BMP2(37G/190T)转染组ALP活性分别为(30.56±0.46)nmol·min－1·mg－1和(29.62±0.68)nmol·min－1·mg－1，与其他实验组相比差异有统计学意义(P<0.05)，两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。BMP2基因的外显子2中的Ser37Ala(T/G)多态性与稳定转染的C3H10T1/2细胞中的ALP活性呈正相关。

结论
BMP2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)多态性通过TGF－β/Smad信号通路促进小鼠OPLL成骨，可能机制是上调Smad4和ALP蛋白表达水平。