|
|
|
摘要 目的 探讨二烯丙基二硫（DADS）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的影响及其机制。 方法 使用BMSCs专用生长培养基培养BMSCs，每隔2 d更换一次培养基，当细胞生长至大约80%汇合时，以1∶3的比例进行细胞传代。使用第3代至第5代BMSCs进行实验。将BMSCs接种至96孔板，过夜培养后加入不同浓度DADS（0、1、10、25、50、100 μg/ml），分别培养1、3、7 d，通过细胞计数试剂盒⁃8（CCK⁃8）实验确定DADS 合适浓度。将细胞分为BMSCs 组、BMSCs+DADS 低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组，其中BMSCs组进行常规成骨诱导培养；BMSCs+DADS低剂量组在BMSCs组基础上加入25 μg/ml DADS；BMSCs+DADS高剂量组在BMSCs组基础上加入50 μg/ml DADS。此外，在BMSCs+DADS 高剂量组基础上加入0.4 μg/ml Wnt 抑制剂Dickkopf⁃1 重组蛋白（DKK⁃1）（BMSCs+DADS 高剂量+DKK⁃1 组），用以验证DADS 促成骨分化无翅基因相关整合位点（Wnt）/β⁃连环蛋白（β⁃catenin）通路相关机制。各组成骨诱导培养7 d后，通过碱性磷酸酶（ALP）染色与活性检测评估早期ALP活性。各组成骨诱导培养14 d后，采用茜素红S染色及定量检测分别评估晚期钙结节数量及吸光度（A）值。各组成骨诱导培养7 d后，采用免疫荧光染色检测骨钙素（OCN）荧光信号强度，通过qRT⁃PCR 及Western blot 法检测Ⅰ型胶原α1（COL1A1）、Runt相关转录因子2（RUNX2）和ALP等成骨标志物的表达水平。通过转录组测序分析探索DADS促成骨分化的潜在信号通路。采用Western blot 法检测Wnt3a、β-catenin 蛋白相对表达水平；而后使用DKK-1 抑制Wnt/β-catenin 通路并检测BMSCs组、BMSCs+DADS高剂量组和BMSCs+DADS高剂量+DKK-1组Wnt3a、β-catenin和成骨分化标志蛋白相对表达水平。 结果 DADS的合适浓度为0~50 μg/ml。ALP染色及活性检测结果显示，成骨诱导培养7 d后，BMSCs+DADS低剂量组、BMSCs+DADS高剂量组ALP染色程度较BMSCs组均增强，以及ALP活性较BMSCs组均升高（P<0.01），其中BMSCs+DADS高剂量组高于BMSCs+DADS低剂量组（P<0.01）。茜素红S染色及定量结果显示，成骨诱导培养14 d后，BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组钙结节数量较BMSCs组均增多，以及BMSCs+DADS低剂量组、BMSCs+DADS高剂量组A值较BMSCs组均升高（P<0.01），其中BMSCs+DADS高剂量组高于BMSCs+DADS低剂量组（P<0.05）。免疫荧光染色结果显示，成骨诱导培养7 d后，BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组OCN荧光信号强度较BMSCs组均增强，且BMSCs+DADS高剂量组强于BMSCs+DADS低剂量组。qRT⁃PCR检测结果显示，成骨诱导培养7 d后，BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组COL1A1基因表达水平均高于BMSCs 组（P<0.01），且BMSCs+DADS 高剂量组高于BMSCs+DADS 低剂量组（P<0.05）；BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组RUNX2基因表达水平均高于BMSCs组（P<0.01），且BMSCs+DADS高剂量组高于BMSCs+DADS低剂量组（P<0.01）；BMSCs+DADS低剂量组ALP基因表达水平较BMSCs组差异无统计学意义（P>0.05），但BMSCs+DADS高剂量组高于BMSCs组（P<0.01）和BMSCs+DADS低剂量组（P<0.05）。Western blot法检测结果显示，成骨诱导培养7 d后，BMSCs+DADS 低剂量组和BMSCs+DADS 高剂量组COL1A1 蛋白表达水平均高于BMSCs 组（P<0.01），且BMSCs+DADS 高剂量组高于BMSCs+DADS 低剂量组（P<0.05）；BMSCs+DADS 低剂量组和BMSCs+DADS 高剂量组RUNX2 蛋白表达水平均高于BMSCs 组（P<0.01），且BMSCs+DADS 高剂量组高于BMSCs+DADS低剂量组（P<0.01）；BMSCs+DADS低剂量组ALP蛋白表达水平较BMSCs组差异无统计学意义（P>0.05），但BMSCs+DADS 高剂量组高于BMSCs 组（P<0.01）和BMSCs+DADS 低剂量组（P<0.01）。转录组测序分析结果提示DADS可能通过Wnt信号通路发挥促成骨分化作用。Western blot法检测结果显示，成骨诱导培养7 d后，BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组Wnt3a蛋白表达水平均高于BMSCs 组（P<0.01），且BMSCs+DADS 高剂量组高于BMSCs+DADS 低剂量组（P<0.05）；BMSCs+DADS低剂量组和BMSCs+DADS高剂量组β⁃catenin蛋白表达水平均高于BMSCs组（P<0.01），而BMSCs+DADS高剂量组较BMSCs+DADS低剂量组差异无统计学意义（P>0.05）。验证Wnt/β⁃catenin通路在DADS促成骨分化中作用的Western blot法检测结果显示，BMSCs+DADS 高剂量组Wnt3a和β⁃catenin蛋白表达水平较BMSCs组均升高（P<0.01），而BMSCs+DADS高剂量+DKK⁃1组较BMSCs+DADS 高剂量组均降低（P<0.01）；BMSCs+DADS 高剂量组成骨标志蛋白COL1A1、RUNX2、ALP 表达水平较BMSCs 组均升高（P<0.01），而BMSCs+DADS 高剂量+DKK⁃1 组较BMSCs+DADS高剂量组均降低（P<0.01）。 结论 DADS能够促进BMSCs成骨分化，其促成骨机制是通过激活Wnt/β⁃catenin信号通路实现。
|
|
|
|
| [1] |
张元文 陈梦佳 袁瑾辉 李春刚. “转运医学”的概念和内涵[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 436-442. |
| [2] |
裴子硕 王振洲 白祥军 白雪卿 鲍刚 陈博 陈海鸣 陈骏 陈扬 陈逸凡 陈增淦 崇巍 崔红旺 崔泳 党星波 都定元 杜立 方建江 封亚平 冯贵龙 冯辉斌 等. 合并腹腔内高压/腹腔间隙综合征严重创伤患者连续腹内压监测专家共识（2026版）[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 369-384. |
| [3] |
李永奇 耿旭 蒋利强 李绍钦 胡世兵 贾中芝 沈良云. 骨盆骨折伴盆腔出血患者动脉栓塞治疗后30 d内死亡的危险因素及其预测效能[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 400-407. |
| [4] |
马志强 吕刚 马超 买买艾力·玉山 王筠. 基于术中被动屈肘活动度与韧带残端质量指导治疗陈旧性肘关节脱位的临床效果[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 430-435. |
| [5] |
王任先 房乾 叶嘉文 袁忠华 任泉仲 王町町 相磊 段顺 蒋协远 徐福建. 多功能透明质酸钠/超支化聚赖氨酸水凝胶制备及其治疗感染性骨骼肌缺损的效果评价[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 452-464. |
| [6] |
刘泓杉 索默然 王振博 李忠海. 脊髓损伤动物模型的类型及其构建方法研究进展[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 499-506. |
| [7] |
贾飞飞 韩素琴 胡飞平 时艳艳 吕敏 冯乐玲 应瑛. 揿针联合中药熏蒸对手外伤术后痰瘀互结型指痹的康复效果评价[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 443-451. |
| [8] |
朱振洋 周煜辰 王恒 卢洋 陈诚 陈晓庆. 脱细胞细胞外基质在脊髓损伤治疗中的应用及机制研究进展[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 491-498. |
| [9] |
. 中文目录[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 1-2. |
| [10] |
. 英文目录[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 3-4. |
| [11] |
游苏宁. 战创伤医学的一代宗师 抒家国情怀的不朽典范
——致敬《中华创伤杂志》总编辑王正国院士[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 351-353. |
| [12] |
周恒星 陈凌霄 袁文健 关斌 郑睿远 徐斌 田晨 赵华 徐万龙 宗少晖 曹勇 陈国良 陈琳 陈乙瑞 冯皓宇 高中洋 郜献雷 郭涛 贺宝荣 胡荣 黄博雅 等. 成人胸腰段爆裂骨折合并急性脊髓损伤诊疗指南（2026版）[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 354-368. |
| [13] |
井莹莹 苏佳灿. 影响骨质疏松性骨折愈合的免疫衰老因素及应对策略[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 385-391. |
| [14] |
马玉鹏 黄涛 洪焕玉 李宇 姜俊杰. 不同内固定方式治疗Denis Ⅱ区单侧骶骨纵向骨折合并骨盆后环垂直不稳定的有限元生物力学分析[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 392-399. |
| [15] |
孙洋洋 陈剑 吕夫新 史风雷. 经髂嵴顺行螺钉固定髋臼后柱骨折的安全通道分析及其初步临床应用[J]. 中华创伤杂志, 2026, 42(4): 408-415. |
|
|
|
