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| 脊髓损伤所致脑膜淋巴管引流功能障碍对大脑继发性神经炎症及神经元损伤的影响 |
| 陈义 唐渝 闵令霞 谭明亮 丛勃雅 侯景明 冯州 |
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摘要 目的 探究脊髓损伤（SCI）导致脑膜淋巴管（MLVs）引流功能障碍是否诱发远隔大脑区域的继发性神经炎症及神经元损伤。方法 选取52只雌性C57BL/6小鼠，按随机数字表法分为假手术组、SCI组、阴性对照腺相关病毒组（阴性对照组）及过表达血管内皮生长因子⁃C（VEGF⁃C）腺相关病毒组（VEGF⁃C组），每组13只。假手术组仅切除椎板，但不损伤脊髓。SCI组、阴性对照组及VEGF⁃C组采用改良Allen法打击装置损伤T9节段脊髓，建立SCI模型。阴性对照组和VEGF⁃C组于SCI建模前4周经枕大池注射3 μl阴性对照腺相关病毒和过表达VEGF⁃C腺相关病毒。伤后56 d，通过枕大池注射Alexa Fluor™ 647卵清蛋白（OVA⁃647）示踪剂，2 h后评估各组颈深淋巴结（dCLN）中OVA⁃647占比；采用免疫荧光检测各组MLVs标志物淋巴管内皮透明质酸受体⁃1（LYVE⁃1）占比及大脑皮层、海马、中脑、丘脑中小胶质细胞标记物离子钙结合适配器分子1（Iba1）的表达量；通过ELISA法检测各组上述各脑区肿瘤坏死因子⁃α（TNF⁃α）、白细胞介素⁃1β（IL⁃1β）水平；采用尼氏染色法检测各组上述各脑区的神经元数量。结果 伤后56 d，假手术组dCLN 中OVA⁃647 占比高于SCI 组和阴性对照组（P<0.01），而SCI组和阴性对照组dCLN中OVA⁃647占比低于VEGF⁃C组（P<0.05）。伤后56 d，假手术组硬脑膜LYVE⁃1占比高于SCI组和阴性对照组（P<0.01），而SCI组和阴性对照组硬脑膜LYVE⁃1占比低于VEGF⁃C组（P<0.05）。伤后56 d，与假手术组相比，SCI组和阴性对照组大脑皮层、海马、中脑、丘脑Iba1 阳性小胶质细胞数量均增加（P<0.01）；与SCI 组和阴性对照组相比，VEGF⁃C 组上述各脑区Iba1阳性小胶质细胞数量均减少（P<0.01）。伤后56 d，与假手术组相比，SCI组和阴性对照组上述各脑区TNF⁃α及IL⁃1β水平均升高（P<0.05）；与SCI组和阴性对照组相比，VEGF⁃C组上述各脑区TNF⁃α及IL⁃1β水平均降低（P<0.05）。伤后56 d，与假手术组相比，SCI组和阴性对照组上述各脑区神经元存活数量均减少（P<0.05）；与SCI组和阴性对照组相比，VEGF⁃C组上述各脑区神经元存活数量均增加（P<0.05）。结论 SCI可导致MLVs引流功能障碍，进而引起远隔大脑区域的继发性神经炎症和神经元损伤。
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