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| 泛杀素功能化的聚集诱导发光微泡协同声-光动力清除耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的效果 |
| 邢琼丹 穆玉明 陈尚珂 姚粝芹 马有财 穆文博 |
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摘要 目的 制备泛杀素(UBI29‑41)功能化、共负载聚集诱导发光(AIE)荧光分子和万古霉素
(Van)的微泡(UBI@MAV),并验证其联合超声靶向微泡破坏(UTMD)技术及光动力疗法(PDT)后,
对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的靶向渗透能力及清除效果。 方法 采用薄膜水化
法制备微泡,并在其基础上负载Van、AIE及UBI29‑41制备出的UBI@MAV;同时制备仅负载Van的微泡
(MV)和仅负载AIE的微泡(MA)作为对照。采用荧光显微镜、扫描电镜、荧光分光光度计、紫外分
光光度计及Zeta粒度电位仪评价UBI@MAV的形态、载药情况、粒径、电位及稳定性;采用细胞计数
试剂盒8(CCK‑8)法检测其细胞毒性。构建MRSA 生物膜模型,采用激光共聚焦显微镜观察
UBI@MAV对生物膜的靶向结合及渗透能力。进一步将MRSA生物膜分为UTMD‑MV组、UTMD‑MA组、
UTMD‑UBI@MAV组、UTMD+PDT‑MV组、UTMD+PDT‑MA组和UTMD+PDT‑UBI@MAV组,相应干预后
采用扫描电镜观察生物膜结构,结晶紫染色检测生物膜密度,活/死细菌染色及平板菌落计数评价残
余细菌活性。 结果 UBI@MAV呈规则球形结构,分散性良好;在670 nm和280 nm处分别检测到AIE
特征发射峰和Van特征吸收峰,提示AIE和Van成功负载。UBI@MAV粒径为(462.3±40.8)nm,表面电
位为(5.5±0.9)mV,室温静置10 h内电位无明显变化(P>0.05)。治疗浓度UBI@MAV(1×10⁷个/ml)与
3T3‑L1细胞共孵育24 h后,细胞存活率>85%。激光共聚焦显微镜显示,UBI@MAV较微泡和MA具有
更强的MRSA 生物膜靶向结合能力,并可在孵育30 min 内实现生物膜全层渗透。扫描电镜显示,
UTMD+PDT‑UBI@MAV组细菌溶解明显,生物膜结构完整性受到更显著破坏。结晶紫染色结果显示,
UTMD+PDT‑UBI@MAV组生物膜密度均低于UTMD+PDT‑MV组、UTMD+PDT‑MA组及UTMD‑UBI@MAV
组(P<0.05)。活/死细菌染色和平板菌落计数进一步显示,UTMD+PDT‑UBI@MAV 组死菌比例较其
他处理组进一步增加,残余菌落数减少为(320.33±21.03)CFU/ml,显著少于其他处理组(P<0.05)。
结论 UBI@MAV 具有良好的形态稳定性、载药能力、生物相容性及MRSA 生物膜靶向渗透能力。
UTMD+PDT联合UBI@MAV可显著破坏MRSA生物膜结构,降低生物膜密度并抑制残余细菌活性。
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