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摘要 目的 探讨成骨生长肽（OGP）修饰的甲基丙烯酰化丝素蛋白（SilMA）水凝胶微球（OSFM）结合聚己内酯（PCL）复合支架修复大鼠创伤性颅骨缺损的效果。方法 通过微流控技术结合光固化法制备丝素蛋白水凝胶微球（SFM），并采用1⁃乙基⁃（3⁃二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）/N⁃羟基丁二酰亚胺（NHS）交联法将OGP偶联至SFM表面得到OSFM；利用3D打印技术构建多孔PCL支架。通过光镜和扫描电镜观察SFM及PCL形貌并分析SFM粒径，同时使用高效液相色谱法（HPLC）测定OGP在OSFM中的释放率。将骨髓间充质干细胞（BMSC）分为对照组、SFM组和OSFM组。SFM组和OSFM组分别与100 mg微球共培养，对照组不做处理。在共培养3 d后，通过钙黄绿素⁃AM（Calcein AM）和碘化丙啶（PI）染色和细胞计数试剂盒8（CCK⁃8）法评估OSFM的生物相容性及对细胞活性的影响；共培养并成骨诱导7、14 d后，分别进行碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S（ARS）染色，评价OSFM对BMSC体外成骨诱导能力的影响。选取24只SD大鼠，按随机数字表法分为对照组、PCL组、SFM+PCL组和OSFM+PCL组（每组6只）。通过钻孔法建立颅骨缺损模型，然后将PCL、SFM+PCL及OSFM+PCL植入大鼠颅骨缺损区，对照组仅钻孔、切开和缝合。伤后4、8周取标本，通过Micro⁃CT三维重建及新骨体积（BV）、BV与初始骨缺损体积（TV）比（BV/TV）分析，组织学HE染色及Masson染色评估各组骨再生效果。结果 材料表征结果显示，SFM 表面呈现多孔结构，粒径均匀，粒径为（200.5±10.2）μm。PCL支架具有规整的孔隙结构，孔径均匀，表面光滑。OGP在微球中的体外释放具有持续性和稳定性，体外释放时长达14 d，累计释放率约为85%。生物相容性实验结果表明，对照组、SFM组及OSFM组BMSC存活率分别为（94.6±1.2）%、（95.8±1.4）%和（95.2±1.3）%（P>0.05）。体外成骨实验结果表明，诱导7 d后，OSFM组ALP染色面积占比为（50.8±3.7）%，高于SFM组的（23.5±3.7）%和对照组的（16.2±1.9）%（P<0.01）；诱导14 d后，OSFM组ARS染色面积占比为（18.7±2.4）%，高于SFM组的（7.5±1.6）%和对照组的（5.2±1.0）%（P<0.01）。动物实验中，Micro⁃CT三维重建结果显示，伤后4周，OSFM+PCL组BV、BV/TV分别为（7.8±0.4）mm³、（20.8±1.6）%，大于PCL组的（4.3±0.4）mm³、（9.0±1.0）%和对照组的（2.9±0.3）mm³、（6.7±0.4）%及SFM+PCL组的（5.3±0.7）mm³、（11.7±0.5）%（P<0.05）。伤后8 周，OSFM+PCL 组BV、BV/TV 分别为（9.1±0.4）mm³、（33.1±1.7）%，大于PCL 组的（5.3±0.4）mm³、（13.5±0.9）%和对照组的（2.9±0.6）mm³、（9.3±0.5）%及SFM+PCL 组的（6.2±0.3）mm³、（15.4±1.1）%（P<0.05）。伤后4、8周，HE染色结果显示，PCL组和对照组缺损区主要为纤维组织填充，几乎未见新骨生成；SFM+PCL组新骨生成量较PCL组有所增加；OSFM+PCL组新生骨组织覆盖大部分缺损区域，新骨沿支架表面生长，并且与支架紧密结合。Masson染色结果显示，OSFM+PCL组缺损区域有大量胶原沉积，且与周围骨组织整合良好，骨修复效果显著优于其他组。结论 OSFM结合PCL复合支架兼具生物活性分子的缓释功能与3D打印支架的力学支撑优势，可增强成骨诱导能力、提供良好的结构稳定性和细胞黏附环境，且通过“缓释成骨信号和结构支撑”的多重机制，有效修复大鼠创伤性颅骨缺损。
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